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台湾のマイコプラズマ研究の現況

翁　仲　男 財団法人　台湾養豚科学研究所

　翁仲男先生のお話によると台湾でのマイコプラズマ研究者は屏東科技大学、中山大学、陽明大学、台湾大学、台湾養豚科学研究所に博士が約９名、修士約１０名、研究員が約１５名程とのことです。以下は台湾語で、猪は豚の意です。（事務局）
翁 仲 男　所長
台湾養猪科学研究所
中華畜牧獣医学会理事長
　在台湾目前従事微漿菌的研究以 Mycoplasma hyopneumoniae為主要対象、因為養猪（養豚）事業在台湾是重要的経済資源、但是台湾属亜熱帯海島型気候、高温多湿、有40−90％的猪感染Mycoplasma hyopneumoniae、造成猪隻飼料換肉率下降、生長遅緩，甚至誘発次発性病原感染使経済損失相当厳重。因比我們投入相当多的人力及物力、来解決這個問題、目前我們研究的主軸主要可帰納為下列四大項：

（一） Mycoplasma hyopneumoniae致病機転的研究
　我們発現Mycoplasma hyopneumoniae　存在一個分子量為110kDa之吸附因子、在生化特性上的研究発現、這是一個由18kDa及両個 54kDa次単位蛋白以双硫鍵組成的大分子、trypsin　不能消化其中的　５４kDa次単位、但対　５４kDa次単位能形成三個切口。以 N-glycosudase F 去除 N-連接糖基並以 concanavalin A 辨識糖基、発現５４kDa次単位為糖蛋白、若完全去除糖基漿減少　５４kDa　次単位興猪気管上皮細胞的交互作用。 用猪抗染Mycoplasma hyopneumoniae 的血清証賓此分子中５４kDa次単位抗原性最強、而且菌体連続継代１００次並不会影響此次単位蛋白的表現量。 其外們我還発現染Mycoplasma hyopneumoniae　存在一種Cu/Zn型superoxide dismutase (Cu/Zn SOD)的酵素、此酵素的功能是在転変代謝過程中所産生的 superoxide anions 成為H2O2、而H2O2很可能就是造成猪気管上皮繊毛気化並使其壊失清除能力的原因之一。是酵素単体之分子量為１７ kDa、其活性可被H2O2及KCN抑制、但対SDS及びurea的耐受性非常強、対温度及 proteinase K的処理也具很強的抵抗力、我們己経純化此酵素、其活性可達７１４２U/mg protein。由等電點的分析発現此酵素存在pI 6.5及4.4両個区域。由於吸附因子及SOD均為微漿菌致病的重要因子故此二因子在活体動物中所扮濱的角色成為未来継続探討的主題。

（二） Mycoplasma hyopneumoniae 微膠嚢口服疫苗的開発
　利用泛粘膜免疫系統（common mucosal immune system）濱生的局部性免疫（local immunity）來防禦猪黴漿菌的感染、遏止病情悪化、應該優於一般的 針剤疫苗注射措施。在動物疾病之免疫防治上、口服疫苗具有以下優點：
　（１）免疫方式較為簡便、安全。
　（２）誘発分泌抗体（secretory antibody）的効果較好。
　（３）比較能為畜主所接受。
　（４）製造生産之成本較低。 因此、開発動物用口服疫苗是目前動物消化道及呼吸道感染疾病防疫的重要課題。
本研究係提出一種製備口服疫苗微膠嚢剤型之配方設計及製造方法。 在配方設計方面、我們採用具備抗酸性之腸溶性高分子包覆材（例如：HPMC及乙基繊維素水溶散液）為基剤或殻膜、興抗原的量調製而成。 由於所使用之包覆材不但具有保護抗原避免胃酸破壊、而且模擬食物経胃嚢排至小腸後pH値提升之現象、我們漿此微膠嚢顆粒浸泡在pH値至6〜7之緩衝液時、該腸溶性包覆材可以快速崩解而釈出抗原、達到所謂的釈放控制（controlled release)給築機制。 在製備技術方面、我們是將猪黴漿菌肺炎Mycoplasma hyopneumoniae抗原興腸溶性包覆材溶液及賦型剤均匆相混後、直接以同歩噴霧乾燥法（co-spray drying)、同時進行抗原包覆興殻膜成型製程。 利用同時噴霧乾燥法所製造之微球体、平均粒径甚小、範囲約材 5μｍ至20μｍ。 依据薬剤学理論、此種粒径微細之円球顆粒、材胃嚢滞留時間較短、可減少冐酸及酵素之破壊、慶該是一種優良之剤型。 由於本研究所開発之微膠嚢疫苗生産方法、簡便快速而且具有量産規模、未来将可應用此項技術従事動物用口服疫苗之製造。

（三）Mycoplasma hyopneumoniae 針剤疫苗之開発
　目前在台湾地区、一般使用注射猪肺炎微漿菌全菌不活化aluminium gel疫苗、其最大優點為安全性高、但其最大欠點則為免疫保護効力軟弱、由文献資料顕示注射油質佐剤疫苗、可獲得相対較高的免疫保護効力、因此漿應用微射流均質乳化機研製無不良副作用且乳化顆粒微細、穏定度高的 Mycoplasma hyopneumoniae 油質佐剤疫苗、未来也漿研就針剤及口服疫苗的配合使用以期更有効提高疫苗的免疫保護効力。

（四）次單位疫苗之應用
　進行猪肺炎微漿菌重要抗原的捜尋、目前研究此菌之去DNA酵素、包含此酵素的純化、鑑定分類及其生化功能並漿其基因選殖和定序、其外也選殖了97吸附因子之一部分序列、希望架構造些基因的大量表現載体、以大量合成具抗原性的蛋白、在漿此基因産物添加於伝統全菌疫苗之中、以提昇伝統全菌疫苗的抗原性、進而提高疫苗的免疫保護効果、達到疫病防治的最終目標。